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TOSOH凝膠色譜柱操作與維護建議

更新時間:2025-12-24瀏覽:316次

  TOSOH凝膠色譜柱操作與維護建議如下:
 
  一、操作建議
 
  溶劑與樣品準備
 
  溶劑選擇:使用HPLC純溶劑,必要時過濾去除顆粒物。對于SW系列色譜柱(如G2000SWXL、G3000SWXL),流動相需與水互溶,如乙腈、甲醇等,避免使用對不銹鋼有腐蝕性的溶劑。
 
  溶劑脫氣:通過超聲脫氣減少氣泡干擾,防止柱效降低或形成氣室。
 
  樣品溶解:用流動相溶解樣品,并過濾(如0.2μm或0.45μm濾膜)去除固體顆粒,避免堵塞色譜柱。
 
  色譜柱安裝與排氣
 
  安裝步驟:
 
  拆卸色譜柱入口密封螺絲,觀察是否有溶劑滲出。若有,直接連接管路;若無,表明柱內可能進入空氣。
 
  將色譜柱出口端連接至進樣閥,用流動相反方向沖洗(流速0.2mL/min),直至流出溶劑無氣泡。
 
  確認氣體排盡后,按正確方向連接色譜柱。
 
  排氣關鍵:避免溶劑流速過快或壓力驟升,以免降低柱性能。
 
  運行參數設置
 
  流速與柱溫:根據色譜柱型號(如SW系列建議1.0mL/min)和樣品性質設定流速;柱溫通常控制在20-60℃,需穩定在設定值。
 
  檢測器參數:根據檢測器類型(如UV檢測器)設置波長等參數,確保數據準確性。
 
  進樣操作
 
  手動進樣:吸取50-100μL樣品溶液,緩慢注入進樣口,避免氣泡和漏液。
 
  自動進樣:按儀器界面提示設置進樣體積、速度等參數,確保重復性。
 
  分析后清洗
 
  清洗溶劑選擇:
 
  若流動相為緩沖溶液,先用蒸餾水沖洗柱內鹽分,再用合適溶劑(如甲醇)沖洗。
 
  對于SW系列,可用100%甲醇或異丙醇、*等極性稍弱的溶劑洗脫吸附物質。
 
  清洗時間與流速:根據污染程度調整,一般為30分鐘至數小時,流速0.5-1.0mL/min。
 
  二、TOSOH凝膠色譜柱維護建議
 
  日常維護
 
  壓力監測:定期檢查柱前后壓力,異常時排查原因(如篩板堵塞、填料污染)。
 
  基線校準:每月檢查基線穩定性,若噪聲>0.5mAU(UV檢測器)或漂移>0.1mAU/min,需清洗檢測器流通池或更換氘燈。
 
  泵密封更換:若發現泵頭滲液、壓力不穩定或流速誤差超過±2%,立即更換密封圈,避免漏液損壞設備。
 
  長期保存
 
  短期保存(隔夜或周末):用不含緩沖鹽的流動相保存,或80%左右有機相(如甲醇/水=80/20)防止長菌。
 
  長期保存:
 
  反相柱:純甲醇或乙腈,或80%有機相。
 
  離子交換柱、水性SEC柱:水溶液(加0.05%NaN?防霉)。
 
  正相柱:無論短期或長期,均推薦保存在所用流動相中。
 
  標簽標注:在柱身貼標簽,明確保存溶劑和日期,避免誤用。
 
  再生處理
 
  適用場景:長期使用后柱效下降(如理論塔板數低于初始值80%)。
 
  再生方法:
 
  有機物污染:純甲醇或乙腈以0.5mL/min流速沖洗2-4小時。
 
  鹽沉積或蛋白質污染:階梯式沖洗(50%乙腈+0.1%TFA沖洗1小時→0.1M NaOH溶液沖洗2小時→純水平衡至中性)。
 
  驗證再生效果:注射標準樣品(如聚乙二醇或藍葡聚糖),對比再生前后保留時間與峰形。
 
  防污染措施
 
  避免交叉污染:不同樣品分析間用強溶劑沖洗色譜柱。
 
  使用保護柱:在分析柱前加裝短保護柱(5-30mm),攔截雜質,延長主柱壽命。
 
  防止微生物滋生:水性流動相中加NaN?(0.05%)或定期更換溶劑。
 
  物理防護
 
  避免碰撞與震動:防止柱床變干或填料松動。
 
  溫度控制:室溫保存,避免凍結(0℃以下)或高溫(>40℃)環境。

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